心肌肌鈣蛋白I（cTnI）的測定注意事項

心肌肌鈣蛋白（cTnI）作為判斷心肌細(xì)胞受到損害的“金指標(biāo)”，已被廣泛應(yīng)用于臨床中， 但由于cTnI在外周血中既有游離形式，又有cTnI-cTnC、cTnI-cTnT等不同形式的復(fù)合物存在，加之不同生產(chǎn)企業(yè)間的抗血清與不同形式中的cTnI反應(yīng)存在一定程度上的差異，以至于測定結(jié)果不一致；目前臨床測定cTnI的方法尚無統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，且測定結(jié)果由各廠家自定，優(yōu)劣難分，本文主要對cTnI檢測的注意事項做一介紹。目前對cTnI的體外診斷試劑檢測方法學(xué)有免疫熒光定量法。免疫層析分析法具有很好的臨床符合性，應(yīng)是cTnI體外診斷試劑盒的首選檢測方法。同時免疫層析分析法還具有不需要大型儀器設(shè)備、操作快速簡便、可以提供床旁檢驗等優(yōu)點滿足了臨床對檢驗速度的要求。因此，對 AMI 患者可采用免疫層析定量法進行快速初篩，可為臨床提供更可靠、準(zhǔn)確的診斷依據(jù)，為臨床監(jiān)測治療效果提供理論支持。

cTnI檢測注意事項

不同的檢測方法對同一樣本的檢測值為什么會有那么大的差別呢？主要是由于所用的診斷抗體原料特異性不同。心肌肌鈣蛋白（cTnI）在人體內(nèi)的存在形式多種多樣，而不同試劑的抗體檢測的到底是什么？有幾點需要考慮：

1. 復(fù)合體問題

肌鈣蛋白Tn是肌肉收縮的調(diào)節(jié)蛋白，TnI與另兩個亞基TnC、TnT的結(jié)合常數(shù)分別為1.5*108（有Ca2+存在時）和4.4*105。有研究者提出，人體內(nèi)的cTnI先以TnI-TnC-TnT的形式釋放到人血液里，不久之后降解成TnI-TnC復(fù)合體形式和TnT，所以，病人血清中的cTnI大部分是以TnI-TnC復(fù)合體形式存在的，而用提純的或者基因重組表達的cTnI抗體，有的并不能識別它的復(fù)合體形式，有的卻與復(fù)合體的親和力比與cTnI單體的更強。所以能夠精確測定cTnI單抗必須既能識別cTnI的游離單體，又能識別它的復(fù)合體，而且對復(fù)合體造成的影響不敏感。

2. 水解問題

TnI是個極易水解的分子，在心肌壞死過程中，心肌細(xì)胞線粒體中的各種蛋白水解酶會釋放出來，使得心肌肌鈣蛋白（cTnI）處于極易水解的環(huán)境中。目前尚不清楚cTnI水解的具體時間和參與其水解的具體酶。In vitro試驗表明，20h后，壞死組織中的cTnI只有1%-3%保持完整，Morjana的試驗表明cTnI在血液中C端先被降解，產(chǎn)物的一部分從N端被降解，最終得到兩個主要的水解產(chǎn)物，分子量分別為18kd和14kd。總體來說，中間部分28-110殘基是穩(wěn)定區(qū)域。Shi的研究發(fā)現(xiàn)，中間部分前半段的穩(wěn)定得益于它本身的一級結(jié)構(gòu)，后半段的穩(wěn)定則是由于TnI-TnC復(fù)合體中TnC的保護。Shi還在試驗中對比了不同的cTnI檢測試劑，發(fā)現(xiàn)所用抗體有的識別cTnI的N端，有的識別C端，有的識別中間部分?，F(xiàn)在，研究者和生產(chǎn)者的共識是檢測cTnI的抗體應(yīng)該針對它穩(wěn)定的中間區(qū)域。

3. 磷酸化問題

心肌肌鈣蛋白（cTnI）分子的第22和23個殘基是兩個Ser，它們在體內(nèi)都可以被Kinanse A磷酸化，所以理論上在梗死病人的血液中存在cTnI分子的4種磷酸化形式：未磷酸化態(tài)、22Ser磷酸化態(tài)、23Ser磷酸化態(tài)和22、23Ser均磷酸化態(tài)。Katrukha等用免疫方法證明，病人血清中確有相當(dāng)一部分cTnI呈磷酸化態(tài)，而Marston等通過放射性試驗發(fā)現(xiàn)，受損心肌中磷酸化態(tài)的cTnI比正常心肌中要少。磷酸化會大大改變cTnI分子的構(gòu)象，從而影響一些抗體與它結(jié)合。

4. 氧化還原形式問題

心肌肌鈣蛋白（cTnI）含有兩個Cys殘基（Cys-79和Cys-96），其中巰基的氧化會影響TnI與其他Tn亞基的結(jié)合，也可能影響與單抗的結(jié)合。在體內(nèi)釋放的cTnI既有氧化形式又有還原形式。Wu等曾經(jīng)發(fā)現(xiàn)，一些檢測試劑對氧化形式的cTnI識別能力更強，大多數(shù)試劑則對兩種形式的識別沒有區(qū)別。專家指出，用于檢測的抗體應(yīng)該不抗第79和第96個殘基，并且既識別氧化形式又識別還原形式。

參考文獻

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